1、检查水位：这是高压蒸汽灭菌锅使用前必须要注意的一个问题，只有高水位才能够有效的进行灭菌。屏幕上会显示锅内水位的高低，一般我们尽量使水位淹过三角架，但不能使水淹过内层桶。如果水经常用，应该过一段时间就需更换。
2、包好灭菌物放入其中：将待灭菌的物品用两层报纸完整地包好，然后放到内层桶中。如果有多个物品需要灭菌，需注意各灭菌物之间要留有足够空隙，以保证蒸汽的流通，达到较好的灭菌效果。
3、盖上盖子：使用灭菌锅配套的扳手对称的把螺母旋紧，一定要旋紧，否则将会漏气。而打开时也使用同样的操作，否则因为热胀冷缩螺丝而打不开。
4、设置相关参数：一般灭菌的相关参数是105kpa，121℃，15~30min。打开开关，
5、排气操作：打开放气阀，排净冷空气，然后关上放气阀。这一步一般的初学者都易忽略。如果不进行这一步就会导致锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果。一般是等锅内温度上升到100℃，放一次气即可。
6、放气操作：当灭菌锅发出警报时，整个灭菌的过程才结束。此时打开放气阀，再次放气，最后无蒸汽溢出时才可以打开锅盖。注意打开锅盖时不要把脸靠近，防止蒸汽突然涌出造成伤害。
