1、首先，在YPD平板上划线毕赤酵母X33菌株，在28-30摄氏度培养两天，以得到分散的单菌落。
2、然后，挑取酵母单菌落，接种至含有10mlYPD培养基的100ml三角瓶中，在30摄氏度250-300r/min培养过夜至饱和。
3、然后，取300微升的培养物接种至含有150ml新鲜YPD培养基的500ml三角摇瓶中，在28-30摄氏度205-300r/min培养过夜，约十小时至OD600达到1.3-1.5.
4、然后，将细胞培养物于4摄氏度1500g离心五分钟，弃上清液，用150ml预冷的无菌水悬浮菌体沉淀。
5、然后，在4摄氏度1500g离心五分钟，弃上清液后用75ml的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬。
6、然后，在在4摄氏度1500g离心五分钟，弃上清液后用10ml的冰预冷的1mol/l的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬。
7、最后，在4摄氏度1500g离心五分钟，弃上清液后用300微升的冰预冷的1mol/l的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬，其终体积约为500微升，移至0.5ml的离心管中，进行冰浴待转化。
