T淋巴细胞转化试验

 时间:2026-02-14 18:39:23

1、小鼠脾细胞悬液的制备:


取一个灭菌的平皿,加入5ml Hank's液。颈椎脱臼法处死小鼠,取脾脏,放入平皿中,在钢网上研磨并过筛,制成细胞悬液。取出100μl用于计数。将其余细胞悬液移入一离心管中,离心1500rpm,7min,(或1000rpm,10min)弃去上清,用RPMI1640 培养液稀释,制成2.5×106 / ml的脾细胞悬液,然后加入ConA使每孔最终浓度为2μg/ml,同时做不加ConA的阴性对照孔。

2、将上述细胞悬液加入96 孔平底培养板中,每孔0.1ml。

3、将培养板放入含有5%CO2的37℃培养箱中培养48-72 小时,在培养结束前


4-6 小时,于培养板各孔内加入1mg/mlMTT液,10μl/孔。37℃培养6 小时。

4、各孔内加入0.01M 盐酸—异丙醇110μl,30 分钟内(或加2%SDS 100ul/孔,过夜)用酶标测定仪测OD 值,测定波长570nm。

5、实验结果


将实验组和对照组三个复孔的OD 值平均。
转化值=实验组的平均OD 值-对照组的平均OD 值。

T淋巴细胞转化试验

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