1、制胶，一般用10%的胶（分离胶）跑15KD到80KD的蛋白，浓缩胶用4%
2、跑胶，进胶的电压维持在120V左右最好，浓缩胶的电压在90V左右，分离胶的电压在120到150之间
3、转膜，我用的是干转，一般14分钟（蛋白分子量在25至80之间）
4、牛奶封闭1h（脱脂牛奶），最好现用现配
5、一抗孵育过夜，一般大于16h效果比较好
6、洗膜（1X TTBS洗2遍，1XTBS洗2遍）一般我洗8分钟1次
7、二抗孵育1h
8、洗膜（1X TTBS洗2遍，1XTBS洗2遍）一般我洗8分钟1次
9、扫膜
